Pembiakan tahap ketiga (F3) bertujuan memperbanyak miselium jamur yang berasal dari pembiakan tahap kedua (F2). Media yang digunakan pada pembiakan tahap ketiga atau F3 ini sama dengan yang digunakan pada pembiakan tahap kedua (F2), baik alat, bahan, maupun langkah-langkah yang dilakukan. Dari setiap botol atau bungkus biakan F2 dapat diinokulasikan ke dalam sekitar 200 botol atau bungkus biakan F3. Caranya buka bungkus media F2, remas-remas dan tuang miselium di atas cawan porselen, lalu inokulasikan ke dalam media F3 . Selanjutnya, biakan F3 diinkubasi selama satu bulan sampai miselium tumbuh memenuhi media. Miselium yang tumbuh pada biakan F3 ini sudah sampai pada tahap siap diinokulasikan pada media tanam untuk dibesarkan di dalam kumbung menjadi jamur siap konsumsi. Sumber : Budi Daya Jamur, AgroMedia